產品名稱：核蛋白提取(qu)試劑盒(he)
產品型號：R0050-100T
產品報價：
產品特點：產品簡介： 本核(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)提(ti)取試劑(ji)(ji)盒提(ti)供了(le)一種簡單、方便的(de)從(cong)培養細(xi)胞(bao)或新鮮組織中抽提(ti)核(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)的(de)方法。整個過(guo)程(cheng)只需約(yue)60分鐘(zhong)就可以將核(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)和(he)漿(jiang)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)從(cong)細(xi)胞(bao)中分離出(chu)來。得到的(de)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)可以用(yong)于Western blot等實驗(yan)。本試劑(ji)(ji)盒通過(guo)漿(jiang)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)抽提(ti)試劑(ji)(ji)使細(xi)胞(bao)膨脹(zhang)破(po)裂(lie)，釋放出(chu)胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)，再通過(guo)離心得到細(xi)胞(bao)核(he)。然后通過(guo)核(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)抽提(ti)試劑(ji)(ji)抽提(ti)得到細(xi)胞(bao)核(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)。本試劑(ji)(ji)盒可以抽提(ti)50個樣品。
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核蛋白提取試劑盒
本核蛋白提取試劑盒提(ti)(ti)(ti)供了一(yi)種(zhong)簡單、方便的從培養細(xi)(xi)(xi)胞(bao)或新鮮組織(zhi)中(zhong)抽提(ti)(ti)(ti)核(he)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)的方法。整個(ge)過程(cheng)只需(xu)約(yue)60分鐘就可(ke)(ke)以將核(he)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)和漿(jiang)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)從細(xi)(xi)(xi)胞(bao)中(zhong)分離出來。得(de)到(dao)的蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)可(ke)(ke)以用于Western blot等實驗。本(ben)試(shi)劑(ji)(ji)盒通過漿(jiang)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)抽提(ti)(ti)(ti)試(shi)劑(ji)(ji)使細(xi)(xi)(xi)胞(bao)膨脹破裂，釋放出胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)，再通過離心得(de)到(dao)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)核(he)。然后通過核(he)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)抽提(ti)(ti)(ti)試(shi)劑(ji)(ji)抽提(ti)(ti)(ti)得(de)到(dao)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)核(he)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)。本(ben)試(shi)劑(ji)(ji)盒可(ke)(ke)以抽提(ti)(ti)(ti)50/100個(ge)樣(yang)品。
核蛋白抽提試劑盒
對于體外培養細胞：
1．根據用量取適當的漿蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。PMSF
需現用現加，若目標蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入 DTT 終濃度 0.5mM。
2．對于貼壁細胞，去除培養液，用 PBS 洗一遍，收集細胞，或用 EDTA 消化后吹打下細胞（好不用胰酶硝化，以免過度消化蛋白）。500 g 離心 2～3 分鐘收集細胞，吸盡上清留下沉淀備用。
3．對于懸浮細胞：用 PBS 洗一遍，500 g 離心 2～3 分鐘收集細胞，吸盡上清，留下細胞沉淀備用。
4．按照每 20ul 細胞沉淀加入 200ul 漿蛋白抽提試劑的比例加入裂解液。
5．高速劇烈渦旋 15 秒，使細胞*分散開。若沉淀沒有*分散，可以適當延長渦旋時間。
6．500 g 離心 2～3 分鐘，去上清。
7．加入漿蛋白抽提試劑 200ul，高速劇烈渦旋 5 秒，冰浴 10 分鐘。
8．高速劇烈渦旋 5 秒，4℃12000～16000g 離心 10 分鐘。
9．上清即為抽提得到的細胞漿蛋白。可進行后續的 PAGE、Western，但蛋白濃度很低，可能需要濃縮。
10．*吸盡殘余的上清，避免細胞漿蛋白污染，加入 100ul 核蛋白抽提試劑。
11．高速渦旋 15 秒或用移液器吹打*分散,放回冰浴中 5 分鐘，4℃12000～16000g 離心 10 分鐘。
12．立即吸取上清預(yu)冷的(de)(de)樣品(pin)管(guan)中，此即為抽(chou)提得到的(de)(de)細(xi)胞核蛋白。可進行后續(xu)實(shi)驗或(huo)-70℃凍(dong)存。
對于組織樣品：
把(ba)組織稱重后，盡可(ke)能切成(cheng)非(fei)常細小(xiao)的碎片(pian)，按每 50mg 組織加入 200ul-500ul PBS，用勻(yun)漿(jiang)器冰上勻(yun)漿(jiang)勻(yun)漿(jiang)制成(cheng)細胞懸液，500 g 離心(xin) 2～3 分鐘收集(ji)細胞，吸盡上清，收集(ji)沉淀。加入 200ul 漿(jiang)蛋白(bai)抽提(ti)試劑后接上述步(bu)驟 5
參考文獻：
《Lactobacillus plantarum NA136 improves the non-alcoholic fatty liver disease by modulating the AMPK/Nrf2 pathway》 作者:Zijian Zhao，Chao Wang ，Li Zhang，Yujuan Zhao，Cuicui Duan，Xue Zhang，Lei Gao，Shengyu Li 期刊:Applied microbial and cell physiology 影響因子:3.67 PMID:31115630
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
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